"Dan Ferro has taught some of the most
important singers of the 20th Century"
Brian Zeger - The Juilliard School
The Metropolitan Opera

"Intensive study of vocal technique as applied to the literature for active singers"

Méningite bactérienne au Burkina Faso: Surveillance par des tests de réaction en chaîne de la polymérase sur le terrain

Contexte En plus des fréquentes épidémies de méningococcie du groupe A, la méningite bactérienne endémique due principalement à Neisseria meningitidis, pneumocoque et Haemophilus influenzae de type b est un problème grave en Afrique subsaharienne Amélioration de l’identification de l’agent étiologique en cas de méningite bactérienne Pour décrire l’épidémiologie de la méningite bactérienne et évaluer l’utilité des tests de PCR en chaîne par polymérase sur le terrain, nous avons mis en place une surveillance de la méningite basée sur la population au Burkina Faso pendant l’utilisation de la PCR, de la culture et de l’antigène. Tests de détection Résultats Parmi les personnes âgées de plusieurs mois, les cas de méningite à méningocoque, de méningite à pneumocoques et de méningite à Haemophilus influenzae de type b étaient des cas n =, des cas n =, et des cas n = per, des personnes par an. ,% étaient dus à N. meningitidis sérogroupe W pneumocoque m l’eningite causait% des décès et se produisait selon un schéma saisonnier similaire à celui de la méningite méningococcique. Parmi les cas de méningite à pneumocoque et de méningite à méningocoque du sérogroupe W,% se produisaient chez les personnes & gt; La plupart des patients, indépendamment de l’étiologie de leur maladie et de l’existence d’une épidémie, ont reçu une thérapie de courte durée avec du chloramphénicol huileux Comparée à la culture comme étalon-or, la sensibilité et la spécificité de la PCR sur le terrain étaient élevées; ce résultat a été confirmé au Burkina Faso et à ParisConclusions Une identification précise et rapide des agents étiologiques est essentielle pour améliorer le traitement et la prévention de la méningite et, par conséquent, la PCR devrait être plus largement utilisée en Afrique. W, et H influenzae type b auront tous un impact majeur sur le fardeau de la méningite bactérienne Les recommandations d’antibiotiques doivent prendre en compte l’importance de S pneumoniae, même pendant la saison épidémique

L’Afrique subsaharienne a connu de fréquentes épidémies de méningite à Neisseria meningitidis, principalement dues à la méningite à méningocoque de sérogroupe A N meningitidis, reconnue depuis , mais les flambées n’ont été documentées que récemment En outre, le sérogroupe X a récemment L’importance de la méningite bactérienne endémique et épidémique en Afrique subsaharienne a également été signalée récemment La surveillance de la méningite en Afrique est entravée par la difficulté de transport en temps opportun des échantillons de peste porcine classique en provenance de l’Afrique subsaharienne. Le manque de capacités de surveillance systématique en laboratoire sur le terrain peut contribuer à ne pas apprécier la contribution d’agents tels que Haemophilus influenzae et Streptococcus pneumoniae, en plus de la méningite à méningocoque, à la charge globale de la méningite , en particulier au cours de l’épidémie ou “sec” seaso n La technologie PCR offre la possibilité de surmonter ces obstacles Nous avons mené une étude prospective de surveillance de la méningite basée sur la PCR pour documenter le fardeau de méningite dû à divers agents étiologiques, pour suivre le rôle continu du sérogroupe W dans les épidémies de méningite à méningocoque et pour évaluer l’utilité. de la technologie PCR en tant qu’outil de surveillance dans les régions d’Afrique où la méningite est endémique, c’est-à-dire la «ceinture de la méningite» africaine

Méthodes

orex; Biorad si l’échantillon de CSF était visiblement nuageux.Deuxièmement, nous avons examiné les registres de patients dans tous les centres de santé de la zone d’étude pour identifier les cas de méningite bactérienne présumée mais non inclus dans l’étude par le personnel local. Un test d’agglutination au latex Pastorex a été le seul test effectué pour déterminer l’étiologie de la méningite bactérienne dans ce groupe de patients. La méningite bactérienne a été classée dans la catégorie «N meningitidis». Méningite «H influenzae» ou «S pneumoniae» sur la base d’un résultat positif au test de culture, de PCR ou d’agglutination au latex, pour chaque personne résidant dans les districts d’étude ayant présenté un cas suspect de méningite pendant la période d’étude. tous les âges étaient admissibles à l’inclusion dans l’étude; cependant, nous n’avons pas tenté d’évaluer ou de recueillir des données sur d’autres organismes, tels que ceux associés à la méningite chez les nouveau-nés. Tout résultat positif a été considéré comme représentant un cas de méningite, même si les autres résultats étaient négatifs; la sensibilité à la culture était faible et, occasionnellement, la PCR n’a pas été effectuée plusieurs jours après la collecte des échantillons, mais un test d’agglutination au latex a été effectué immédiatement. Pour les souches H influenzae, l’agglutination au latex et la PCR identifiée pas d’autres sérotypes ; car toutes les souches de H influenzae pour lesquelles un sérotype a été identifié ont été identifiées comme sérotype b, nous avons supposé, pour les calculs d’incidence, que toutes les souches de H influenzae non typées étaient également de sérotype b Pour des échantillons de CSF, différents tests ont identifié différentes étiologies. les résultats étaient le résultat de la contamination, et nous avons donc inclus seulement le résultat du test positif par cas; Le résultat de la culture était utilisé s’il était disponible et, si ce n’était pas le cas, le résultat de la PCR était utilisé. Méthodologie de laboratoire L’analyse PCR primaire a été réalisée à l’unité Neisseria, Institut Pasteur, Paris, France. le laboratoire de biologie moléculaire du Centre Muraz à Bobo-Dioulasso L’identification par PCR était basée sur l’amplification du gène crgA, pour N meningitidis ; le gène bexA, pour H influenzae [,,]; et le gène lytA, pour S pneumoniae [,,] Pour la prédiction du sérogroupe méningococcique, une PCR multiplex a été développée qui utilise simultanément les oligonucléotides du gène siaD pour les sérogroupes B, C, Y et W et le gène mynB pour le sérogroupe A Des souches bactériennes et des échantillons de liquide céphalorachidien ont été conservés à – ° C Pour le contrôle qualité des tests de PCR réalisés localement au Burkina Faso, un échantillon de souches isolées et de spécimens de LCR avec des résultats positifs ou négatifs du Centre Muraz a été envoyé à l’Institut Pasteur Paris, France Pour les échantillons de CSF ayant initialement donné des résultats négatifs à l’Institut Pasteur, le kit Qiaquick Qiagen a été utilisé pour tester la présence d’inhibiteurs de PCRA l’Institut Pasteur, le sérotype , et le sérosubtype de tous les isolats de méningocoques a été déterminé comme décrit ailleurs N souches de méningocoque ont été testés pour la sensibilité à l’enclos l’icilline G, l’amoxicilline, le céfotaxime, le chloramphénicol, la rifampine et la spiramycine, qui sont des agents d’intérêt pour le traitement des β-lactamines et du chloramphénicol ou pour la chimioprophylaxie de la rifampicine et de la spiramycine; l’essai a impliqué l’utilisation de la technique de diffusion de disque, ainsi que la mesure des CMI par Etest AB Biodisk, comme décrit ailleurs Le sérotype a été déterminé par PCR pour H influenzae sérotype b Des isolats pneumococciques, ont été choisis au hasard et envoyés au Centre National de Référence des Pneumocoques de Paris à des fins de contrôle qualité La tranche d’âge des patients à partir desquels ces isolats ont été retrouvés était de plusieurs mois à des années, tous les districts étudiés étaient représentés. Cas de méningite associés aux isolats différents mois, allant du premier au dernier mois de l’étude La détermination du sérotype a été réalisée en utilisant des particules de latex sensibilisées avec des antisérums fournis par le Statens Seruminstitut Copenhagen, Danemark; ces antisérums permettent d’identifier des sérotypes connus. Des souches de sérotypes connus ont été utilisées comme témoins internes. La résistance antibiotique à l’oxacilline, au chloramphénicol et / ou à l’érythromycine a été déterminée à l’aide de la méthodologie de diffusion du disque. Les centres américains pour le contrôle et la prévention des maladies et les données ont été analysés à l’aide du logiciel SPSS, version approuvée par SPSSStudy Ce projet de surveillance a été approuvé par le comité d’éthique du Centre Muraz et soutenu par le ministère de la Santé du Burkina Faso

Résultats

Caractéristiques des patients Nous avons identifié des patients dont la maladie répondait à une définition clinique de la méningite. Les patients ont été identifiés rétrospectivement. Parmi ces patients, un agent étiologique de la méningite a été identifié pour les patients identifiés par les registres de patients. un échantillon CSF visiblement nuageux ou qui avait un compte WBC de & gt; cellules / mm et n’a pas eu d’agent étiologique identifié, y compris les patients pour lesquels il n’y avait pas d’enregistrement de culture, détection d’antigène, ou PCR ayant été réalisée Figure La méthodologie de laboratoire utilisée pour identifier les cas de méningite variait selon l’étiologie Seize pour cent des cas ont rapporté ou avaient des documents indiquant qu’ils avaient reçu un vaccin polysaccharidique A / C méningococcique au cours des années précédant leur inclusion dans l’étude, bien que, pour la plupart des patients, la vaccination le statut était inconnu

Figure Vue largeDownload slideCaractéristiques des personnes soupçonnées de méningite bactérienne au Burkina Faso en -Figure View largeDownload slideCaractéristiques des personnes soupçonnées de méningite bactérienne au Burkina Faso en –

Tableau View largeTélécharger la méthodologie de laboratoire utilisée pour identifier les cas de méningite bactérienne au Burkina Faso en, par agent étiologiqueTable View largeTélécharger la lameTechnologie de laboratoire utilisée pour identifier les cas de méningite bactérienne au Burkina Faso en, par agent étiologique Agents étiologiques et saisonnalité Organisme étiologique le plus communément identifié était N meningitidis% des cas, suivi par S pneumoniae% des cas et H influenzae type b% des cas, avec la survenance de cas de méningite à méningocoque et de méningite à pneumocoque montrant des schémas saisonniers similaires figure Le sérogroupe prédominant associé aux cas de méningite à méningocoque était sérogroupe W% des cas, suivi du sérogroupe A% des cas sérogroupe n’a pas pu être déterminé pour% des cas de méningite à méningocoque La détermination phénotypique a été réalisée pour les souches méningococciques collectées pendant la saison épidémique et pour les souches méningococciques collectées pendant la saison. Les souches p ont été: P-, le génotypage de souches représentatives a montré que ces souches appartenaient au complexe électrophorétique de type ET- clonal Huit souches de sérogroupe A présentaient le phénotype P-, et une autre souche était non rongible et non typable Quatorze des isolats de S pneumoniae étaient évalué; de ceux-ci, étaient serotype; étaient sérotype A; et chacune appartenait aux sérotypes, et F Toutes les souches de H influenzae testées ont été identifiées comme étant de type b par PCR

Figure View largeTélécharger slideMenaces de méningite bactérienne au Burkina Faso en, par mois et agent étiologiqueFigure View largeTélécharger slideMenaces de méningite bactérienne au Burkina Faso en, par mois et agent étiologique Proportions d’incidence et de létalité L’incidence annuelle de la méningite bactérienne chez les personnes de tous âges était des cas Les incidences annuelles de méningite à méningocoque, de méningite à pneumocoques et de méningite à influenzae de type b étaient des cas n =, cas n =, et cas n = per, respectivement, les cas les plus fréquents chez les nourrissons et les enfants qui étaient & lt; Pour les enfants de – ans, N meningitidis était l’agent étiologique le plus commun, mais pour les personnes de ⩾ ans, l’incidence de S pneumoniae était plus de deux fois plus élevée que celle de N meningitidis et H influenzae type b combiné

Tableau View largeTableau de téléchargement Incidence annuelle de la méningite bactérienne aiguë par, personnes au Burkina Faso en -, par agent étiologique et groupe d’âgeTable View largeToile de téléchargementIncidence annuelle de la méningite bactérienne aiguë par, personnes au Burkina Faso en -, par agent étiologique et groupe d’âgeL’incidence de N meningitidis sérogroupe W était plus élevé que celui de N meningitidis sérogroupe A chez les personnes de tous les groupes d’âge, avec la plus grande différence observée chez les personnes des groupes d’âge les plus jeunes Bien que les infections à N meningitidis sérogroupe W et S pneumoniae % des cas dans chaque groupe sont survenus chez les personnes de ⩾ ans Les incidences annuelles dans les zones urbaines étaient plus élevées que dans les zones rurales pour les cas de N meningitidis vs cas par personne, S pneumoniae cas vs cas par personne et H influenzae type b cas par cas, personnes La proportion de cas mortels était de% chez les personnes atteintes de méningite à S pneumoniae,% pour les personnes avec H influenzae type b méningite, et% pour les personnes avec N meningitidis méningite La proportion de cas de décès dus à S pneumoniae était élevé pour tous les groupes d’âge et S pneumoniae représentaient% des décès qui ont été enregistrés au cours de l’étude

Figure View largeTéléchargement slideCase proportions de décès pour les cas de méningite bactérienne au Burkina Faso en -, par groupe d’âge et agent étiologiqueFigure View largeTélécharger diapositive Proportions de mortalité par cas de méningite bactérienne au Burkina Faso en -, par groupe d’âge et agent étiologiqueAntibiotique et sensibilité aux antibiotiques patients atteints de méningite pneumococcique et patients atteints de méningite de type H influenzae pour lesquels des données sur les schémas thérapeutiques étaient disponibles, patients recevant ou recevant du chloramphénicol huileux conformément aux recommandations d’antibiothérapie empirique Treize patients ont reçu des traitements plus longs allant jusqu’à plusieurs jours de monothérapie au chloramphénicol; les patients ont reçu une monothérapie à l’ampicilline ou à l’amoxicilline, chez qui les patients ont été traités pendant des jours ou moins; et les patients ont reçu une variété d’autres thérapies. Les antibiotiques utilisés n’ont pas différé pendant la saison, au cours de laquelle le seuil épidémique a été dépassé, et la saison où aucune épidémie n’a été déclarée. sensibles à tous les antibiotiques évalués Sensibilité et spécificité du PCR Dans la présente étude, des tests de culture et d’agglutination au latex étaient parfois effectués immédiatement, mais la PCR était retardée jusqu’à plusieurs semaines, ce qui diminuait potentiellement la sensibilité de la PCR. Pour déterminer la sensibilité et la spécificité, les résultats de la PCR sur le terrain ont été comparés avec les résultats positifs de la culture réalisée pour les personnes soupçonnées de méningite bactérienne qui ont subi à la fois la PCR et la culture. La PCR était la plus élevée pour N meningitidis%, suivie de H influenzae type b%, et S Tableau de pneumoniae% La spécificité de la PCR était élevée pour tous les organismes et, comme prévu, la PCR a identifié des cas qui n’avaient pas été trouvés par culture pour chaque étiologie

Tableau View largeTélécharger diapositiveSensibilité et spécificité de la PCR, comparée à celles de la culture, pour les personnes suspectées de méningite bactérienne au Burkina Faso en -Table View largeDownload slideDétection et spécificité de la PCR, comparée à celles de la culture, pour les personnes présumées de méningite bactérienne au Burkina Faso Contrôle de qualité externe Des souches de méningocoques identifiées au Burkina Faso ont été soumises à une analyse de sérogroupe à l’Institut Pasteur. Pour les isolats, les résultats de l’analyse concordaient avec le sérogroupe identifié par PCR au Burkina Faso Un isolat identifié comme N meningitidis sérogroupe W au Burkina Faso a été identifié comme irrangeable à l’Institut Pasteur; cependant, cette souche était supposée être du sérogroupe W par PCRLe contrôle de qualité des échantillons CSF bouillis a été réalisé à l’Institut Pasteur, y compris les échantillons positifs pour H influenzae et non soumis à un typage supplémentaire et ceux confirmés comme H influenzae type bn =, N meningitidis sérogroupe W n =, N meningitidis sérogroupe A n =, non menageable N meningitidis n =, et S pneumoniae n =, ainsi que des échantillons négatifs tests PCR, y compris la purification si indiqué une étape non réalisée dans le domaine, trouvé identique Résultats des échantillons testés Parmi les résultats discordants, ceux pour les échantillons étaient négatifs sur le terrain mais positifs à l’Institut Pasteur étaient positifs pour S pneumoniae, pour H influenzae, et pour N meningitidis sérogroupe W, et les résultats pour les échantillons étaient négatifs à la L’Institut Pasteur, mais était positif sur le terrain, était positif pour S pneumoniae, pour H influenzae, pour N meningitidis sérogroupe W, et pour N hommes non rongibles ingitidis Les résultats discordants restants concernaient des étiologies différentes identifiées sur les sites de test

Discussion

comme la sensibilité relativement faible de la PCR pour la détection du pneumocoque et H influenzae de type b, un résultat qui n’est apparemment pas lié aux erreurs méthodologiques de terrain mais qui peut être dû à un faible rendement d’ADN à l’extraction. être un obstacle substantiel à une utilisation plus répandueDans la présente étude, le sérogroupe W du complexe clonal ET était le sérogroupe méningococcique le plus commun identifié En attendant le développement d’un vaccin conjugué monovalent contre le sérogroupe A conçu pour l’Afrique, des études antérieures ont mis l’accent sur les mérites relatifs d’une stratégie à court terme consistant à utiliser le vaccin contre le sérogroupe A uniquement en réponse à une épidémie , ou en combinaison avec une vaccination préventive Si confirmée dans d’autres régions, l’agent pathogène prédominant -y compris parmi les patients qui sont & gt; On peut s’attendre à ce que cet argument soit discutable, du moins pour le moment. Les stratégies immédiates devraient plutôt se concentrer sur l’utilisation appropriée de vaccins polysaccharidiques qui confèrent une protection contre les sérogroupes A et moins pour les patients qui sont & gt; Les stratégies de prévention de routine à long terme devront peut-être aborder la manière de mettre à la disposition de l’Afrique les vaccins conjugués polyvalents contre le méningocoque actuellement en développement dans les pays développés plutôt que de tenter uniquement de développer un sérogroupe monovalent de sérogroupe A Vaccin conjugué utilisé en AfriqueNous avons constaté que S pneumoniae causait la majorité des cas de méningite chez l’adulte et la majorité des décès dus à la méningite et qu’elle avait une incidence similaire à celle de N meningitidis, même pendant la saison épidémique. Proportions de la méningite en Afrique , seules quelques études ont rapporté des taux d’incidence Les pneumocoques contribuent de manière disproportionnée au fardeau de la méningite en raison de l’aggravation de la maladie pneumococcique comparée à celle de la méningococcie [,,]; De plus, les pneumocoques sont la principale cause de pneumonie bactérienne dans le monde en développement. Nos données, si confirmées dans d’autres endroits, suggèrent que la prévention et le traitement doivent se concentrer autant sur le pneumocoque que sur le méningocoque, même dans la ceinture africaine de la méningite. de considérer que le sérotype, un sérotype qui n’est pas inclus dans le vaccin conjugué valent actuellement sous licence, prédomine dans notre échantillon testé parce que le pourcentage de cas de pneumococcie est survenu chez les personnes & gt; Le vaccin polysaccharidique – qui contient du sérotype – peut avoir un rôle en Afrique L’OMS recommande l’utilisation de chloramphénicol huileux à dose unique pour le traitement des cas suspects de méningite en Afrique subsaharienne lorsqu’une épidémie de méningite a été déclarée [, Une partie de la raison de cette stratégie est l’hypothèse que la plupart des maladies seront dues au méningocoque. Cependant, nous avons trouvé que la méningite à pneumocoque avait un profil saisonnier et une incidence similaire à celles associées à la méningite à méningocoque. Le chloramphénicol était courant tout au long de la période d’étude, même en l’absence d’épidémie. Bien que peu de données existent sur l’efficacité, l’utilisation du chloramphénicol pour traiter la méningite à pneumocoque peut conduire à un échec du traitement , une situation qui risque de s’aggraver. organismes résistants au chloramphénicol Ainsi, il est nécessaire de surveiller les profils de résistance aux antibiotiques, a des essais cliniques de traitement au chloramphénicol de courte durée, des examens continus des directives de traitement, et un diagnostic clinique précis et rapide, tel que peut être fourni par PCRIn la présente étude, nous avons sous-estimé l’incidence, parce que les personnes sont décédées sans avoir besoin de soins ou soins reçus sans ponction lombaire En outre, un agent étiologique n’a pas été identifié dans% des cas de méningite purulente, dont beaucoup pour lesquels aucun test de diagnostic n’a été réalisé. Il est peu probable que nous ayons surestimé le nombre de cas Cependant, des erreurs dans les estimations de la population auraient pu conduire à une estimation inexacte de l’incidence. Une incidence annuelle de la méningite des cas /, les personnes implique que, pendant les années qui constituent l’espérance de vie moyenne d’un patient. Burkinan, chez les personnes connaîtront une méningite bactérienne; Les politiques de vaccination et de traitement devraient refléter les agents étiologiques primaires, y compris le pneumocoque et les sérogroupes méningococciques W et A et, chez les enfants, H influenzae de type b De plus, les politiques devraient être sensibles aux changements en cours dans l’épidémiologie de la méningite Nous recommandons de poursuivre l’évaluation et l’expansion de la surveillance basée sur la PCR au Burkina Faso et dans les pays voisins d’Afrique de l’Ouest

Membres des Commissions d’études

Laboratoire Groupe Sanou Oumarou Muraz, Bobo-Dioulasso, Burkina Faso, Dominique Niamba Centre Hospitalier National Souro Sanou, Bobo-Dioulasso, Burkina Faso et Centre Tarnagda Zekiba MurazClinical Investigators Group Flore Ouedraogo Direction Régionale de la Santé, Ministère de la Santé, Bobo -Dioulasso, Burkina Faso, Francine Ouedraogo Direction Régionale de la Santé, Ministère de la Santé, Bobo-Dioulasso, Adrien Sawadogo Centre Hospitalier National Souro Sanou, Bobo-Dioulasso, Burkina Faso, et Pascal Korgho Direction Régionale de la Santé, Ministère de la Santé Santé, Bobo-Dioulasso

Remerciements

Nous remercions Jean-Michel Alonso, Magaly Ducos-Galand, Annie Guiyoule, Dario Giorgini et René Pires. Nous remercions également le Dr Bonkoungou Mété Directeur régional de la Santé et son équipe pour leur aide dans la mise en œuvre de l’étude dans la Région sanitaire de Bobo. Dioulasso, et Dr Roger Sié Hien Directeur du Centre Muraz, pour son soutien dans la mise en œuvre de la technologie PCR pour la méningite bactérienne à Bobo-Dioulasso. Nous remercions Caroline Douay, pour la gestion des données; Mathilde Lourd, pour l’aide en épidémiologie; Emmanuel Duquesnoy, pour la logistique; et Regina Hidohou pour la révision des données Nous sommes reconnaissants à Christophe Sanou, Seydou Bambara et Mathieu Sanou de l’équipe de terrain de l’Association pour l’Aide à la Médecine Préventive de Bobo-Dioulasso, ainsi qu’aux personnels de santé travaillant en pédiatrie et Centre hospitalier national Souro Sanou, les agents de santé des districts administratifs de Bobo-Dioulasso, Bobo-Dioulasso et Houndé, et les techniciens de laboratoire de bactériologie du Centre Hospitalier National Souro Sanou, du Centre Muraz et du centre médical à Hounde, pour leur contribution active à l’étude Nous remercions le Dr Anne le Flèche Unité Biodiversité des Bactéries Pathogènes Emergentes, Institut Pasteur, Paris, France pour le contrôle des souches d’Haemophilus influenzaeFinancial support Aventis Pasteur, Institut Pasteur, et la Fondation Bill et Melinda GatesPotentiel conflits d’intérêts Aucun des auteurs n’a d’intérêt commercial dans les produits qui pourraient être affectés Par les résultats de cette enquête, IP, BDG et BM NL étaient des employés de l’Association pour l’Aide à la Médecine Préventive, qui reçoit un soutien financier substantiel d’Aventis Pasteur – l’un des bailleurs de fonds de l’étude et un fabricant de méningococcie, pneumocoque, et H influenzae type b vaccins