"Dan Ferro has taught some of the most
important singers of the 20th Century"
Brian Zeger - The Juilliard School
The Metropolitan Opera

"Intensive study of vocal technique as applied to the literature for active singers"

Etude prospective cas-témoins de l’association entre les parasites communs des protozoaires entériques et la diarrhée au Bangladesh

Contexte Les causes parasitaires de la diarrhée ont été historiquement identifiées par l’utilisation de la microscopie; Toutefois, l’utilisation de cette technique ne permet pas de distinguer les sous-espèces des génotypes de parasites. Notre objectif était de déterminer, au moyen de méthodes de diagnostic modernes, la proportion de cas de diarrhée au Bangladesh imputables à Cryptosporidium hominis, Cryptosporidium parvum, Entamoeba histolytica, Giardia lamblia A et BMethods Une étude prospective cas-témoins a été réalisée chez des enfants et des adultes présentant une diarrhée à l’hôpital de Dhaka du Centre international de recherche sur les maladies diarrhéiques, au Bangladesh, et chez des sujets témoins présentant une infection asymptomatique. La charge parasitaire et l’espèce et / ou le génotype ont été déterminés par l’utilisation de la réaction en chaîne de la polymérase PCRResultsCryptosporidium species et E histolytica étaient plus fréquents chez les patients souffrant de diarrhée aiguë que chez les sujets témoins sains, pour tous les sujets. âges% vs%; P = et, spécifiquement, pour les mois d’âge% vs%; P = G lamblia assemblage A était également plus fréquente chez les patients souffrant de diarrhée que chez les sujets témoins en bonne santé% vs%; P & lt; Pour les cas de diarrhée, la charge parasitaire dans les fèces, mesurée par le seuil quantitatif de PCR en temps réel, n’était pas plus élevée que chez les sujets témoins présentant une infection asymptomatique. Les cas de diarrhée et de cryptosporidiose étaient moins susceptibles d’être douloureux. sujets témoins% vs%; P & lt ;; les patients atteints d’amibiase sont plus susceptibles d’avoir du sang visible dans les selles, comparativement aux sujets témoins% vs%; P & lt ;; et les patients atteints de giardiase sont plus susceptibles d’être déshydratés, comparativement aux sujets témoins% vs%; P = ConclusionE L’histolytica, le C hominis, le C parvum et l’assemblage de G lamblia A sont des causes importantes de maladies diarrhéiques au Bangladesh

Les maladies diarrhéiques constituent un problème majeur de santé publique qui touche particulièrement les enfants des pays en développement, y compris le Bangladesh Un certain nombre d’agents bactériens, viraux et parasitaires ont été identifiés chez des patients atteints de diarrhée aiguë Entamoeba histolytica, Giardia lamblia et Cryptosporidium Les parasites protozoaires entériques sont généralement considérés comme associés à la diarrhée Néanmoins, le rôle de G lamblia dans les maladies diarrhéiques aiguës est encore controversé La microscopie a été utilisée dans le passé pour détecter ces parasites protozoaires, mais l’examen microscopique est l’utilisation de la microscopie est également moins sensible pour la détection des espèces de G lamblia et de Cryptosporidium et ne peut pas être utilisée pour distinguer les génotypes L’hôpital de Dhaka du Centre International de Diarrhée Recherche sur les maladies, Bangladesh, traite les patients souffrant de diarrhée chaque année Des études antérieures de l’hôpital de Dhaka, où il existe une surveillance systématique du% de tous les patients, ont utilisé la microscopie comme méthode diagnostique. Dans notre étude, nous avons comparé des isolats de E histolytica, de Cryptosporidium species et de G lamblia retrouvés chez des sujets atteints de maladies diarrhéiques aiguës avec ceux retrouvés chez des sujets témoins sans diarrhée, en utilisant des kits de détection d’antigènes et un génotypage PCR Une analyse intermédiaire des données sur l’infection par G lamblia étude a été publiée

Matériaux et méthodes

Population étudiée Les patients de tous âges atteints de diarrhée aiguë étaient en attente d’un traitement pendant la période de mai à avril à l’hôpital de Dhaka du Centre international de recherche sur les maladies diarrhéiques, Bangladesh. Ces patients faisaient partie d’une surveillance systémique systématique de tous les patients. La diarrhée aiguë était définie par: st des selles anormales au cours de l’h précédente et la dysenterie par la présence de globules rouges, de macrophages ou de cellules de pus. Tous les cas ont été traités selon les directives thérapeutiques de l’hôpital de Dhaka du Centre international pour les maladies diarrhéiques Recherche, Bangladesh Les sujets témoins étaient des individus de tout âge atteints d’une infection asymptomatique qui n’avaient pas présenté de maladie diarrhéique au cours des mois précédents et qui étaient inscrits à l’étude par les cliniques externes de l’Université de médecine Sheikh Mujib de Bangabandhu, Dhaka, Bangladesh. utilisation de la microscopie et cultivée à Robinson La détection des protozoaires a été réalisée à l’aide de kits de détection d’antigènes disponibles dans le commerce TechLab pour G lamblia, Cryptosporidium species et E histolytica Des échantillons de selles ont été étalés sur gélose MacConkey pour la détection de ces protozoaires, sur gélose Salmonella Shigella pour la détection de Salmonella et Shigella, et sur gélose taurocholate-tellerite-gélatine pour la détection de Vibrio cholerae Les spécimens de selles ont été examinés pour le rotavirus en utilisant un ELISA, comme décrit ailleurs Les échantillons de selles provenant de sujets témoins sains n’ont pas été analysés. Les génotypes de Qiagen G lamblia ont été déterminés pour des échantillons de selles avec des résultats de microscopie positifs ou avec des résultats d’analyse d’antigène positifs par l’utilisation du kit QIAamp DNA Stool Mini. d’un test PCR en temps réel basé sur une sonde Scorpion, comme décrit ailleurs l’essai amplifie la région a ou bp du gène S rRNA en utilisant des amorces spécifiques d’espèces et / ou de génotypes et les espèces de Cryptosporidium sondes ont été déterminées pour des échantillons de selles avec des résultats positifs de microscopie ou avec des résultats d’essai d’antigène positif en utilisant un technique de PCR en temps réel qui amplifie une séquence codante de Cryptosporidium de fonction inconnue AF Toutes les amplifications ont été réalisées selon ces références sur un système de PCR en temps réel iCycler; Le consentement de BioRadInformed a été obtenu des sujets d’étude, et s’ils étaient enfants, le consentement a été obtenu de leurs parents ou tuteurs Les directives d’expérimentation humaine du département américain de la santé et des services humains, l’université de Virginie et le centre international pour la recherche diarrhéique , Bangladesh, ont été suivies au cours de nos recherches

Résultats

Un total de cas de maladies diarrhéiques aiguës ont été inclus dans notre étude dans le cadre de la surveillance systématique du% de tous les patients admis à l’hôpital de Dhaka du Centre international de recherche sur les maladies diarrhéiques, Bangladesh. % étaient des femmes Il y avait des cas% qui étaient – des mois,% qui étaient – des années,% qui étaient – des années,% qui étaient – des années et% qui étaient & gt; Un total de sujets témoins en bonne santé ont consenti à participer à notre étude. Parmi ces sujets témoins,% étaient des hommes et% étaient des femmes Il y avait des sujets témoins% qui étaient – mois,% qui étaient – ans,% qui étaient – des années,% qui étaient – des années et% qui étaient & gt; ans V cholerae était le pathogène le plus commun isolé des échantillons de selles diarrhéiques

Tableau View largeTélécharger les données sur les entéropathogènes récupérés chez les patients et identifiés à partir du système de surveillance systématique du Centre international de recherche sur les maladies diarrhéiques, Bangladesh, à l’hôpital de Dhaka, mai -Avril Table View largeTélécharger les données sur les entéropathogènes récupérés chez les patients Système de surveillance systématique du Centre international de recherche sur les maladies diarrhéiques, Bangladesh, à l’hôpital de Dhaka, avril-avril Les taux d’isolement des espèces Cryptosporidium et E histolytica chez les patients souffrant de diarrhée aiguë étaient respectivement de% et de% Par exemple, Cryptosporidium parvum et Cryptosporidium hominis étaient présents dans les échantillons de selles diarrhéiques et non diarrhéiques à des pourcentages à peu près égaux. C hominis a été détecté comme la seule cause d’infection en% o f cas patients et en% de sujets témoins infectés par cryptosporidies; des infections mixtes à la fois avec C hominis et C parvum ont été observées chez% des patients et chez% des sujets témoins [P & gt; données non présentées] Nous avons précédemment rapporté de cette cohorte les génotypes d’individus atteints de giardiase; les individus montrés dans le tableau incluent ces individus précédemment rapportés G lamblia, en général, était significativement plus commun parmi les sujets témoins que parmi les patients de cas tableau; cependant, le génotype “A” de G lamblia était associé à un tableau de diarrhée aiguë

Tableau View largeDownload slideDistribution d’isolats de protozoaires parasites récupérés à partir d’échantillons de selles de patients et de sujets témoins, par groupe d’âgeTable View largeTélécharger slideDistribution d’isolats de protozoaires parasitaires récupérés à partir d’échantillons de selles de patients et de sujets témoins, par groupe d’âge

Tableau View largeTélécharger slideDistribution de génotypes d’isolats de Giarida lamblia récupérés à partir d’échantillons de selles de patients et de sujets témoins, en utilisant un test de détection d’antigèneTable View largeTélécharger un diaporamaDistribution de génotypes d’isolats de Giarida lamblia récupérés à partir d’échantillons de selles et de sujets témoins test de détection d’antigène Les patients avec ou sans diarrhée dysentérique et sujets témoins sains ont été testés pour E histolytica L’association de E histolytica avec diarrhée non dysentérique était statistiquement significative pour tous les patients et sujets témoins, alors que l’association de E histolytica avec diarrhée dysentérique était significative plus élevé pour les patients de cas & gt; mois d’âge que c’était pour les sujets de contrôle & gt; Il est intéressant de noter que chacun des échantillons de selles positifs à E histolytica par le test de détection de l ‘antigène obtenus chez les enfants – mois était négatif pour tous les autres agents pathogènes entériques, à l’ exception des E. coli entérotoxinogènes dans les échantillons. Tous ces enfants atteints de diarrhée associée à E histolytica présentaient des selles molles ou aqueuses, n’avaient pas d’antécédents de selles sanglantes et n’avaient pas de globules rouges dans leurs échantillons de selles sélectif.

DiapositiveTélécharger slideAssociation d’Entamoeba histolytica avec diarrhée et dysenterie, en fonction du groupe d’âgeTable View largeTélécharger slideAssociation d’Entamoeba histolytica avec diarrhée et dysenterie, en fonction du groupe d’âgeDans ce tableau, on peut voir que l’âge croissant des patients et des sujets témoins était associé avec une diminution du nombre d’isolats de Cryptosporidium récupérés dans les échantillons de selles, alors que le nombre d’isolats de E histolytica récupérés est resté constant. Cependant, le nombre d’isolats de G lamblia récupérés dans les échantillons de selles a atteint un sommet dans les deux cas Il n’y avait pas de différence statistiquement significative entre le nombre d’isolats de l’assemblage A de G lamblia récupérés, comparativement aux isolats de l’assemblage B, ni le nombre d’isolats de C hominis récupérés, comparé aux isolats de C parvum, entre les différents groupes d’âge. diarrhée associée à l’histolytica et diarrhée associée à Cryptosporidium Les isolats des protozoaires (E histolytica, Cryptosporidium species et G lamblia) ont été récupérés dans les échantillons de selles durant les mois d’été, comparativement à d’autres périodes de l’année.

Figure View largeDownload slideLe nombre d’isolats de l’assemblage A de Giardia lamblia récupérés, comparé aux isolats de G lamblia assemblage B, et le nombre d’isolats de Cryptosporidium hominis récupérés, comparés aux isolats de C parvum, stratifiés par les différents groupes d’âge des patients et des sujets témoinsFigure View largeTélécharger Le nombre d’isolats de l’assemblage A de Giardia lamblia a été comparé à celui des isolats de l’isolat G lamblia B, et le nombre d’isolats de Cryptosporidium hominis a été récupéré, comparé aux isolats de C parvum, stratifié selon les différents groupes d’âge des patients et des sujets témoins

Figure Vue largeDownload slideSeasonality de protozoaires entériques dans le cas des patients souffrant de diarrhée aiguë, comme indiqué par le nombre d’isolats d’Entamoeba histolytica, Cryptosporidium espèces, et Giardia lamblia récupérés à partir des échantillons de selles, par mois de l’annéeFigure View largeDownload slideSeasonality of protozoaires entériques chez les patients diarrhée aiguë, comme indiqué par le nombre d’isolats d’Entamoeba histolytica, de Cryptosporidium species et de Giardia lamblia récupérés dans les échantillons de selles, par mois de l’année.La charge parasitaire a été estimée en mesurant la valeur CT seuil du cycle des tests PCR individuels en temps réel. Il n’y avait pas de différence entre les patients cas et les sujets témoins quant à la quantité d’ADN C parvum, C hominis ou E histolytica par mg de selles. Étonnamment, il y avait significativement moins de G lamblia dans les selles diarrhéiques des sujets témoins, comme l’a Tableau de valeur de CT CT et données de test de détection d’antigène de selles semi-quantitatives non montrées

Tableau View largeTélécharger la diapositive chez les patients et les sujets témoins, mesurée par les valeurs quantitatives de CT du cycle de PCR en temps réel, à l’hôpital de Dhaka du Centre international de recherche sur les maladies diarrhéiques, Bangladesh, mai -April Table ViewTélécharger le diaporamaParasite load in case Les patients atteints de cryptosporidiose étaient moins susceptibles que les autres patients Les patients atteints d’amibiase étaient plus susceptibles que les autres patients d’avoir du sang visible dans leurs selles, et les patients atteints de giardiase étaient plus susceptibles d’être déshydratés. L’examen microscopique des échantillons de selles diarrhéiques a révélé une quantité significativement plus élevée de globules rouges et de macrophages dans les selles. échantillons de selles qui étaient positifs pour la table E histolytica

Tableau View largeTélécharger les caractéristiques cliniques des patients atteints de diarrhée à protozoaires entériques, à l’hôpital de Dhaka du Centre international de recherche sur les maladies diarrhéiques, Bangladesh, mai -April Table View largeTélécharger les caractéristiques cliniques des patients atteints de diarrhée entérique associée aux protozoaires, au Hôpital de Dhaka du Centre international de recherche sur les maladies diarrhéiques, Bangladesh, mai-avril

Discussion

E histolytica et G lamblia ont été identifiés chez% des patients atteints de diarrhée suffisamment sévère pour justifier une hospitalisation, et la cryptosporidiose et l’amibiase ont été diagnostiquées en% des cas de diarrhée qui étaient dans la première année critique de la vie, lorsque mortalité En second lieu, il est apparu que la charge parasitaire de G lamblia, mesurée dans les selles, était inversement liée à la diarrhée. Troisièmement, dans le cas de la giardiase, nous avons étendu notre observation précédente que l’assemblage A, mais pas Enfin, nous avons décrit une manifestation précédemment méconnue de l’amibiase, qui est définie comme une diarrhée non-dysentérique au cours de la première année de vie. Plusieurs études ont examiné des isolats d’E histolytica récupérés dans des échantillons de selles de patients souffrant de diarrhée aiguë mais, en raison de la diarrhée aiguë. l’absence d’étude de cas-témoins, n’a pas permis d’étudier l’association de E histolytica avec la diarrhée non-dysentérique [, ] Chaque fois que des études cas-témoins ont été menées, la microscopie a été utilisée pour le diagnostic; malheureusement, l’utilisation de la microscopie ne permet pas de différencier E histolytica des parasites non pathogènes morphologiquement similaires et prévalents E dispar et E moshkovskii Dans notre étude actuelle, nous avons identifié E histolytica en utilisant un test de détection d’antigène spécifique Bien que E histolytica est généralement connu pour provoquer une diarrhée sanglante, notre étude a démontré que E histolytica pourrait également être une cause de diarrhée aqueuse, en particulier chez les nourrissons. La diarrhée non dysentérique est une présentation courante de l’amibiase est en accord avec l’étude de Samie et al. ; Notre étude a également confirmé l’association entre les espèces de Cryptosporidium et les maladies diarrhéiques aiguës [,,] Des isolats d’espèces de Cryptosporidium ont été retrouvés chez un pourcentage de patients dans une étude précédente réalisée dans Même hôpital Nous avons utilisé un test de détection d’antigène plus sensible pour le diagnostic de la cryptosporidiose dans notre étude, nous avons pu récupérer des espèces de Cryptosporidium d’un pourcentage beaucoup plus élevé de patients. En outre, nous avons démontré que C parvum et C hominis étaient tous deux Cependant, aucun de ces parasites n’était plus susceptible que l’autre d’être associé à la diarrhée, ce qui confirme les observations d’autres chercheurs La prévalence des isolats de Cryptosporidium diminue avec l’âge des patients, ce qui implique qu’une immunité naturelle de longue durée peut persister après une infection à Cryptosporidium au cours des premières années de Le manque de corrélation – ou, dans le cas de G lamblia, corrélation inverse – entre la charge parasitaire et les symptômes de la diarrhée est surprenant. La littérature émergente suggère que la diarrhée due à une infection par cryptosporidia, giardia et entamoeba s’accompagne d’une infection robuste et probablement délétère. La production de cytokines pro-inflammatoires, comme le TNF-α L’absence de corrélation positive entre la charge parasitaire et les symptômes de la diarrhée suggère le rôle primordial joué par le système immunitaire dans les maladies diarrhéiques résultant de ces infections. que seuls les cas de diarrhée suffisamment graves pour justifier une hospitalisation ont été inclus et qu’aucun suivi longitudinal n’a été effectué, il est donc probable que notre étude ne reflète pas l’ensemble des maladies attribuables aux parasites entériques ou à leur impact sur les enfants. peut-être que l’assemblage de B lamblia B, en fait, cause la diarrhée, seulement sous une forme plus modérée ou auto-limitée, ou il pourrait que les parasites entériques ont un effet encore plus important sur les enfants que notre étude l’indique, sous forme de diarrhée plus prolongée ou subclinique Une autre limitation était que les cas et les sujets témoins n’étaient pas parfaitement appariés: les sujets témoins étaient plus âgés que les cas , un fait que nous avons corrigé en analysant les infections en pourcentage de tous les patients ou de sujets témoins dans un groupe d’âge donné. Cependant, il pourrait y avoir d’autres erreurs introduites par l’appariement moins que parfait des patients pour contrôler les sujets. Dans les tests diagnostiques utilisés ou les inhibiteurs de PCR spécifiques aux selles diarrhéiques ou non diarrhéiques, nous avons tenté de contrôler ces facteurs en utilisant à la fois la détection d’antigènes et des tests de PCR sur les échantillons de selles positifs aux parasites. et les tests de diagnostic basés sur la PCR ont validé l’importance des parasites entériques comme cause de diarrhée au cours de la première Cette connaissance facilitera la planification de cohortes longitudinales qui mesureront plus complètement le fardeau de l’infection et servira à élargir notre compréhension clinique de ces infections courantes chez les enfants des pays en développement. monde

Remerciements

Soutien financier De l’Institut national des allergies et des maladies infectieuses de la subvention du Service de santé publique des National Institutes of Health AI-Conflits d’intérêts potentiels WAP a un accord de licence pour le diagnostic de l’amibiase avec TechLab; cependant, toutes les redevances de cet accord sont données à la Société Américaine de Médecine Tropicale et d’Hygiène sans bénéfice pour le WAP Tous les autres auteurs: aucun conflit